化学学报|蝎子毒素多肽WaTx的高效化学合成及氧化折叠研究

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尹昊,陈西同,付邢言等.蝎子毒素多肽WaTx的高效化学合成及氧化折叠研究[J].化学学报,2022,80(04):444-452.

DOI: 10.6023/A21120580

蝎子毒素多肽WaTx的高效化学合成及氧化折叠研究

尹昊1,2陈西同1,2付邢言1,2马艳楠1,2徐以梅1,2张特1,2梁帅1,2杜姗姗3齐昀坤1,2王克威1,2

1. 青岛大学药学院2. 青岛大学创新药物研究院3. 青岛科技大学化工学院

摘要：相比于1-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(HOAt)、1-羟基苯并三唑(HOBt)等传统偶联试剂,新型多肽偶联试剂2-肟氰乙酸乙酯(Oxyma)具有安全、偶联效率高、消旋率低等优势,在多肽合成特别是微波固相合成中得到广泛应用.但是,不同反应温度(例如28、50和75℃)对N,N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)/Oxyma的偶联效率以及对甲硫氨酸(Met)等易氧化氨基酸的影响尚有待研究.瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)通道在感受温度、听觉和炎症痛中发挥重要作用.蝎子毒素多肽芥末受体毒素(WaTx)是一种新型、非共价结合的TRPA1特异性激动剂.本研究利用6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)/N,N’-二异丙基乙胺(DIEA)和DIC/Oxyma缩合体系,首次探索了不同温度下线性WaTx的合成效率以及Met残基的氧化情况.通过一次氧化折叠和两次氧化折叠策略,实现了WaTx的体外快速复性折叠,利用圆二色谱和钙荧光检测等技术评价WaTx的结构和活性.本研究建立了WaTx的温和、高效合成以及复性折叠方法,为固相多肽合成特别是手动固相合成WaTx等含有易氧化基团的二硫键构象锁定多肽提供了重要参考.

关键词： N,N’-二异丙基碳二亚胺(DIC);Oxyma;固相多肽合成;二硫键;氧化折叠;芥末受体毒素(WaTx);多肽毒素;

基金资助： 国家自然科学基金(Nos.21807063,82003647,22177058,81870653)资助项目；
专辑： 工程科技Ⅰ辑
专题： 化学
分类号： O629.72

蝎子毒素多肽WaTx的高效化学合成及氧化折叠研究
尹昊|陈西同|付邢言|马艳楠|徐以梅|张特|梁帅|杜姗姗|齐昀坤|王克威
青岛大学药学院| 青岛大学创新药物研究院| 青岛科技大学化工学院
N,N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)|Oxyma|固相多肽合成|二硫键|氧化折叠|芥末受体毒素(WaTx)|多肽毒素

文章目录

1 引言
2 结果与讨论
2.1 线性多肽的合成和分离纯化
2.1.1 28℃下合成肽1
2.1.2 75℃下合成肽2和肽3
2.1.3 Met替换成Nle,合成肽4～6
2.1.4 50℃下合成肽7和肽8
2.2 线性Wa Tx的复性折叠
2.3 Wa Tx的质谱和圆二色谱分析
2.4 Wa Tx的活性测定
3 结论
4 实验部分
4.1 固相多肽合成
4.1.1 树脂的活化以及Fmoc脱保护
4.1.2 基于HCTU/DIEA的氨基酸缩合
4.1.3 基于DIC/Oxyma的氨基酸缩合,反应温度为50℃
    4.1.4 基于DIC/Oxyma的氨基酸缩合,反应温度为75℃
4.1.5 切肽及多肽的沉淀
4.2 多肽的分离纯化
4.3 氧化折叠流程
4.3.1 一次氧化折叠策略
4.3.2 两次氧化折叠策略
4.4 圆二色谱测试
4.5 Flexstation 3胞内钙流检测

蝎子毒素多肽WaTx的高效化学合成及氧化折叠研究
尹昊|陈西同|付邢言|马艳楠|徐以梅|张特|梁帅|杜姗姗|齐昀坤|王克威
青岛大学药学院| 青岛大学创新药物研究院| 青岛科技大学化工学院

尹昊,陈西同,付邢言等.蝎子毒素多肽WaTx的高效化学合成及氧化折叠研究[J].化学学报,2022,80(04):444-452.

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